油茶issr反应体系建立及优化

以改进的ctab高盐法提取油茶嫩叶总dna，进行简单重复序列间扩增（issr）分析，分别测试了退火温度、模板dna浓度、mg^2＋浓度．dntps浓度，taqdna聚合酶用量和是否加入去离子甲酰胺对反应结果的影响．油茶issr分析的最适反应体系为t在20μl pcr反应体积中．含20ng模板dna，2．5mmol·l^-1mgcl2,0．2mmol·l^-1dntps·1utaqdna聚合酶,0．5pmol·μl^-1引物．1%去离子甲基酰胺，扩增程序为，94℃预变性2min；94℃变性30π，52℃退火30s，72℃延伸90s．反应38个循环;最后在72℃延伸7min．完成机构：江西省植物生物技术重点实验室,江西南昌330032