发根农杆菌介导的茶树发根高频诱导与遗传转化

以两种野生型发根农杆菌菌株、三种共培养培养基和六种外植体为试材，建立了茶树发根高频诱导体系，最高发根诱导频率达30％以上。最佳发根诱导体系为：od600为0．5-0．8的发根农杆菌菌液侵染已培养60-70d苗龄无菌苗茎段10-50min，在添加100mmol／l乙酰丁香酮的ymb固体培养基上共培养2d，在含500mg／l头胞噻肟钠的ms培养基上诱导发根。发根在不含激素的lg0培养基上生长迅速，产生大量侧枝和根毛。pcr证实，发根农杆菌ri质粒t．dna的rola、rolb和roic基因已经插入到发根基因组dna中。应用此发根诱导体系，以含携带bt基因的双元载体质粒pcambia2301的发根农杆菌15834，侵染茶树外植体诱导出发根，pcr和gus组织化学染色证实外源基因已经插入到基因组dna中并获得表达。完成机构：[1]浙江大学茶学系,浙江杭州310029 [2]江苏省徐州生物工程学校,江苏徐州221006